蛋白质N-端测定技术服务
蛋白质N-端测定技术服务服务简介
几乎所有的蛋白合成都起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关,重组蛋白表达纯化产物的分析过程,特别是重组蛋白品的研发和工艺建立过程,需要对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。
目前对蛋白N端测序主要分类两大类,其一为非质谱技术,例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA,再来反推得到蛋白序列;其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处,目前,市面上采用的,依然是基于经典的Edman降解法原理,利用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统进行蛋白N-端测序。
蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,Edman化学降解,其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的游离的氨基酸进行下一个Edman降解,最后通过转移的PTH-氨基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。
样品要求
1 蛋白冻干粉,蛋白溶液,固定在PVDF膜上的蛋白(NC膜不可以)。转膜的蛋白质,需去离子水充分洗涤干净,同时保证每条膜上蛋白量大于1ug。
2、蛋白浓度>1mg/ml, 最小量不得低于10Pmol,蛋白纯度>90%,测序样品不返还。
3、蛋白溶液不含盐,缓冲液,变性剂(SDS)等杂质;标明样品缓冲液的成分。
4、天然纯化多肽样品:HPLC纯度>95%,提供约100ug
5、如果已知蛋白表观分子量或理论的蛋白质序列,请说明。
服务优势
一站式服务:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
检测能力: N 端连续 60 个以上的氨基酸
快速检测:合格样品,1 个工作日可以出结果
专业的技术服务团队
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