目的 建立脊髓型肌萎缩症(SMA)小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养体系,研究反义寡核 苷酸(ASO)对其生物学特性的影响,为深入研究 SMA 发病机制及药物筛选提供可靠的体内模拟工具细胞。

方法 选取刚出生 4 d 的 SMA 小鼠,CO₂ 窒息法处死后,于 75%乙醇中浸泡,分离、纯化骨髓细胞。 细胞荧光检测细胞表 面标志物;RT-PCR 及 Western Blot 研究 ASO 对运动神经元存活基因 2(SMN2)外显子(exon7)列入水平以及运动神 经元存活(SMN)蛋白表达量;EDU 法和 TUNEL 法检测细胞增殖和凋亡能力。

结果 体外分离培养的 SMA 模型小 鼠 BMMSC 具有贴壁生长、可以传代等特点;对 P3 代 BMMSC 进行细胞免疫荧光鉴定结果显示:CD44、CD29 高表 达,CD34、CD45 低表达;转染 ASO 后细胞 SMN2 exon7 列入率显著上升以及 SMN 蛋白表达量显著上调,并显著促进 细胞增殖能力,同时核内 Gemini bodies( gems)数量也有所增多。

结论 成功建立 SMA 小鼠 BMMSC 体外培养体 系,通过阳性药物 ASO 验证可促进 BMMSC SMN2 exon7 列入及 SMN 蛋白表达,为 SMN2 相关调控机制及药物筛选 提供一种新的工具细胞。

阅读原文：SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞体外培养体系的建立.pdf