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模型制备

HPV组织培养物或组织块建立异种移植小鼠肿瘤模型

2022年10月28日 浏览量: 评论(0) 来源:《常见和新发传染病动物模型》 作者:张连峰 秦川 主编 责任编辑:yjcadmin

异种移植的小鼠肿瘤模型是指将人类肿瘤移植在小鼠身上使其生长发育。目前有以下几种移植方法:①组织块移植法;②细胞种植法;③肾包膜下移植法。

1985年,Kreider等用临床尖锐湿疣组织(含HPV11)的提取物感染新生儿包皮碎片,然后种植到裸鼠肾包膜下。随后的3~5个月,在这种环境下,HPV大量复制扩增,引起感染组织增生,这些移植物发展为湿疣性囊肿。产生的空泡细胞的核仁包含大量衣壳抗原和病毒粒子。该实验产生的湿疣具有高度均一性,从中抽提的病毒粒子再次感染人包皮细胞后种植到裸鼠肾包膜下还可以得到同样的结果,表明裸鼠中产生的是有感染能力的HPV。此后,同样方法用于严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠,也获得成功。1990年,该模型被应用于HPV中和试验,首次实现了在动物体内评价HPV中和抗体的保护作用。其检测过程是将待测血清与HPV悬液及包皮组织块共孵育后,将包皮组织块移植入裸鼠肾包膜下培养,一段时间后取出移植物,通过移植物的一些指标改变评价血清中和抗体水平。但该模型实验操作复杂,周期长,约需3个月,对实验者熟练程度要求较高,不适于大批量样本检测。另外该试验需要活的感染性病毒颗粒,从患者乳头瘤组织中可提取的HPV太少,不能满足中和试验的需要。为解决该问题,1987年首次报道了通过裸鼠可在实验室生产HPV11,但这种方法只适用于少数基因型。

付玉环等将含有HPV16的尖锐湿疣组织直接接种于裸小鼠,结果在接种的裸小鼠颜面部出现丝状疣样、寻常疣样增生物,且在增生物中检出HPV16DNA。究其原因,裸小鼠被试验刺激后每天不断地反复用前爪洗脸,吮吸伤口,用舌舔洗身体,重复着皮肤、黏膜接触,可能是感染形成的原因。此经过与人类感染很相似。HPV深入到动物皮内、皮下似无感染威胁。

张菊等将经PCR鉴定为HPV11的尖锐湿疣皮损组织块移植于裸鼠的皮下,发现5周内能较好的保留尖锐湿疣的大部分重要的组织免疫学特征,8周内仍可利用RT-PCR法检测到组织块中的HPV11。然而,此方法只是在短期内“保存”了从临床得到的病理组织,裸鼠本身并没有被HPV11感染而致病,距一般意义上的动物模型尚有很大差距,因此价值有限。

目前应用较多的人宫颈癌动物模型多为小鼠皮下注射HeLa细胞或CaSki细胞。这种以稳定细胞系注射小鼠皮下建立动物模型的方法仅限用于某特定单一细胞系肿瘤生物学特性的研究。

张凯举等将临床手术病人的宫颈癌组织块直接移植于BALB/c裸小鼠腹部皮下使其生长成肿瘤,并证实肿物保留了宫颈癌组织的生物学活性,成功建立了特异性的宫颈癌动物模型。他们应用此方法对3例病人的癌瘤组织进行了重复实验,3组动物的平均成瘤率在90%以上,因此可以认为此方法是一种能较稳定复制患者特异性宫颈癌动物模型的实验技术。

虽然目前应用较多的是人宫颈癌异种移植裸鼠肿瘤模型,但与裸鼠相比由于重症联合免疫缺陷小鼠(SCID鼠)同时缺乏细胞免疫和体液免疫,可以获得更高的成瘤率,Taghian等曾应用TD50定量分析比较6种不同组织来源的人癌在SCID鼠及裸鼠中的可移植性,结果表明,该6种人癌在裸鼠中的TD50定量比在SCID鼠高2.4~200倍,即SCID鼠比裸鼠更易于接受该6种人癌的移植,其可移植性要比裸鼠高2.4~200倍。现已有研究建立了SCID鼠人宫颈癌组织模型。更为重要的是人类自发肿瘤发生于自身免疫系统监视下,SCID鼠恰恰缺少完成免疫球蛋白和T细胞受体基因重组的功能,其T、B淋巴细胞缺失,因而在目前研究的基础上进一步用人类相关免疫细胞(如脐血细胞、骨髓细胞、外周血淋巴细胞等)移植入小鼠体内进行免疫重建,使该肿瘤模型能更好的模拟人自发宫颈癌生物学特征。有研究采用人正常子宫颈移行上皮种植于SCID鼠皮下获得成功,移植物保持了子宫颈移行处鳞柱状上皮和基底膜结构,为进一步动态观察研究HPV感染子宫颈上皮细胞进而诱导癌变的过程提供了理想的动物模型。


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