目的 探讨小鼠第13.5天胚肝细胞是否通过抑制β-Catenin诱导人肝细胞肝癌细胞株HepG2细胞分化及其作用机制。 

方法 用免疫荧光法检测肝细胞标记分子-白蛋白(ALB)的分布,以鉴定小鼠第13. 5天胚肝细胞。 小鼠第13.5天胚肝细胞与HepG2细胞株共培养24h、48h后,采用 qRT-PCR方法检测HepG2细胞株中肝癌标记分子-甲胎蛋白(AFP)、肝细胞分化调控因子-肝细胞核因子4α(HNF-4α)和成熟肝细胞标记分子-细胞色素P450家族成员1B1(CYP1B1)和乙醇脱氢酶1C(ADH1C)的mRNA表达。 共培养48h后,观察 HepG2细胞株形态变化,采用Western blot法检测AFP、HNF-4α和β-Catenin的蛋白含量,免疫荧光法检测β-Catenin蛋白在细胞的分布。 应用β-Catenin抑制剂处理后,观察HepG2细胞株形态变化并且检测AFP蛋白表达。 

结果 原代培养细胞ALB荧光显示阳性。 与对照组相比,共培养后HepG2细胞株中,AFP相对mRNA表达量在24h和48h均显著降低,HNF-4α、CYP1B1和 ADH1C 的相对mRNA表达量在24h和48 h均显著升高。 与对照组相比,共培养48h后, HepG2细胞株生长明显抑制,细胞形态趋于正常肝细胞的六边形,AFP和HNF-4α 蛋白表达明显升高。与对照组相比,共培养48h后,β-Catenin的蛋白含量明显降低,同时HepG2细胞株中β-Catenin的荧光明显减弱。 与对照组相比,β-Catenin抑制剂处理可明显改变HepG2细胞株形态,引起共培养组HepG2细胞株形态更剧烈的变化,显著抑制AFP的蛋白表达。 

结论 小鼠第13.5天胚肝细胞可能主要通过抑制β-Catenin,诱导HepG2细胞株分化。 

阅读原文：小鼠第135天胚肝细胞诱导HepG2细胞分化的作用机制.pdf