1、 慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞以1×10⁵/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10⁵/孔左右。
2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育。
3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。
4、继续培养24小时，用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。
5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白，一般转染48小时后可见明显荧光表达，72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率，可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选，可以在转染3-4天后开始加药。

注意：

1，病毒感染细胞本来效率就较低，感染时的培养基尽量少些；

2，可使用engrene的病毒感染增强剂Envirus代替polybrene，可有效提高病毒的感染效率。