1．实验方法  4月龄的实验用小型猪。常规麻醉，在无菌条件下，摘取腮腺腺泡组织，去除腺小叶包膜等结缔组织，浸泡于Ham F12培养液中(含有100U／ml青霉素、0.1mg／ml链霉素)，将其剪为小于1mm³的小块，用无ca²⁺、Mg²⁺Hank平衡盐溶液洗2次，在37℃于含有2.5mg／ml混合型胶原酶的Ham F12培养液中消化1小时。过滤，常温下静置10分钟，收集细胞于含有50ml／L热灭活胎牛血清、10μg／ml还原型谷胱甘肽、1mmol／L腐胺、5μg／ml转铁蛋白、5μg／ml胰岛素、10ng／ml表皮生长因子、地塞米松的Ham F12完全培养液中。将分离、消化的细胞以10⁴个／ml的浓度接种于经Matrigel铺底的24孔Falcon培养板。倒置显微镜、电镜、角蛋白抗体、α-淀粉酶抗体免疫组织化学染色观察细胞。

2．实验结果  相差显微镜观察：分离的腮腺腺细胞接种后数小时，单个细胞聚集，36小时之内细胞贴附于培养基质表面，接着可见单个细胞从细胞团块边缘伸展爬出，3天左右细胞大多数呈单层贴壁生长，细胞大小较均一，绝大多数为类圆形，排列紧密。第5天时，可见细胞生长连接成片，中央部位细胞增殖旺盛，极少数细胞为多边形与长梭形。细胞在这种条件下可维持存活近3周。HE染色观察见细胞呈单层生长，大多数呈圆形、类圆形，极少数细胞为长梭形。胞核均染、居中。免疫组织化学染色结果显示培养细胞角蛋白单克隆抗体染色呈阳性、α-淀粉酶多克隆抗体染色呈阳性、波形丝蛋白单克隆抗体染色呈阴性。对照组成纤维细胞角蛋白单克隆抗体与α-淀粉酶多克隆抗体染色均呈阴性、波形丝蛋白单克隆抗体染色呈阳性。透射电镜观察：培养的细胞为圆形、类圆形，核居中或偏位，胞质内线粒体、粗面内质网中度发达，高尔基体少量，含有大量的电子密度高低不等的分泌颗粒，每个分泌颗粒由完整的单位膜包绕，颗粒内密度不均，含有大量细小颗粒。细胞膜表面可见密度不等的稀疏的微绒毛。少数细胞胞质内含有微丝，不含分泌颗粒。

(1)蛋白分泌的测定：细胞在24孔板中培养24小时后，测得吸光值为1.58+0.49，蛋白含量为(3±0.93)mg／ml。

(2)α-淀粉酶的测定：结果显示，培养第2天时，培养液中α-淀粉酶含量最高(343U)，随着在体外培养时间的延长，α-淀粉酶含量明显下降。培养第4天后，培养液中淀粉酶含量刺激组较非刺激组明显升高(P<0.05)。培养到第5～6天时，培养液中α-淀粉酶含量降到开始的30％，左右，培养第10天时，培养液中α-淀粉酶含量降到开始的8％以下。

(3)异丙肾上腺素的作用：腮腺细胞在体外长期存活有赖于在培养液中加入促分泌剂。新鲜分离出的腺泡细胞在形态上类似于体内细胞。当在不含异丙。肾上腺素的培养液中培养2天后，细胞皱缩，不到一周，细胞边界模糊、死亡。当加入促分泌剂异丙肾上腺素后，可阻止以上改变。加入异丙肾上腺素组与不加异丙肾上腺素组腮腺细胞均有α-淀粉酶表达，但是表达强弱不等，前者表达增强。

(4)不同浓度血清对细胞生长的影响：在Ham F12完全培养液中加入50ml／L的胎牛血清，腮腺细胞贴壁较快，生长良好。加入100ml／L的胎牛血清，纤维细胞生长旺盛，上皮样细胞生长不良。不含血清时所有细胞均生长缓慢。