七、实验动物屏障环境启动消毒流程

实验动物屏障环境设施 , 在正式启动投入使用前 , 或者是屏障设施停用一段时间、或者污 染后处理再启用 , 都必须进行彻底的消毒处理。通常是采用甲醛(15ml/m3) 熏蒸法或甲醛、高锰酸钾熏蒸法 (甲醛15ml/m3+ 高锰酸钾15g/m3) 对实验动物屏障区环境进行消毒处理 , 经系统运转 72h 后检测其空气中落下菌数及其他环境参数指标 , 经检测全部合格后 , 该屏障设随即可投入使用。

1. 放置动物笼具等物品

工作人员将动物笼具清洗干净后 , 按照设施布局工艺要求整齐摆放于合适的位置 , 以保持实验动物屏障环境的通风换气效果。

2. 卫生与洁净处理

首先用吸尘器将屏障环境内的灰尘处理干净后 , 再使用 2% 新洁尔灭 ( 取 400ml时新洁似加入至 600ml 双蒸水中,用量 :3Oml/m3) 、 0.5% 过氧乙酸 ( 将 1 份过氧乙酸 A 液 +0.8 份过氧乙酸 B 液混合成 5ml 的混合液后 , 加入到 800ml的双蒸水中 , 然后混合 , 经定容至1000ml。用量：30ml/m3) 、稀释 300 倍的碘载体消毒液 , 每日 3 次分别对屏障区域内的墙面进行擦拭和喷雾处理。

3. 贴缝封闭

将高效过滤器送风口和排风口、屏障环境对外的门缝都用干净报纸或塑料布封闭好 , 并将各区域的门关闭好 , 保证熏蒸消毒效果。

4. 甲黯熏蒸消毒

根据实验动物屏障区域的实际体积 ( 长 m ×宽 m ×高时 , 以(15ml甲醛 +15g 高锰酸钾/m3)的熏蒸量置于烧杯 ( 底下垫面积大于烧杯的报纸 , 防止消毒液溢出而污染洁净区地面 ) 。操作时，消毒员必须戴上防毒面具 , 先从屏障环境的最里端开始 , 将酒精灯点着放在烧杯架子底下 , 精好的高锰酸钾倒进烧杯中 , 再慢慢倒入甲醛 , 然后快速退出该区域 , 关好门 , 开始下一个区域操作。也可以不加高锰酸钾而是直接用酒精灯加热的方法 , 使甲醛蒸发以达到消毒效果。

5. 甲醒气体留置

将熏蒸气体留置于实验动物屏障环境中达 24h 以上。

6. 打开密封风口

消毒员按照上述工作人员进入程序 , 带双层口罩或防毒面具经 1 更、淋浴间、 2 更、风淋进入各区域 , 撕开风口的密封纸 ( 注意 : 各区域的门应迅速关闭 ) 。

7. 启动凤机系统换风

启动空调送风机及加压风机后 ,启动系统排风风机 ,使屏障环境按气流方向维持正压(负压环境则先启动排风机、后启动送风机)。

8. 甲醛熏蒸的灭茵效果检查

送风 72h 后 , 屏障环境内不感受到明显的甲醒气味后 , 检测人员按照上述程序进入各区域 , 根据国家标准布置琼脂平皿 ( 内径 9cm, 按照物品消毒程序进行消毒处理 , 其他检测项目也 接着按国家标准操作要求实施 ),3Omin 后带出屏障系统。经 37 ℃培养 48h 后 , 计算出各区域 的空气平均落下菌数 , 小于 3 个 / 皿即可证明达到消毒运行要求 ; 否则需要重新进行甲醛熏蒸消毒。

9. 正式启动空调系统

屏障环境各项参数达到国家标准指标要求后 , 该设施即可正式全部投入使用 , 整个系统维持正常运行 , 直到动物生产周期结束或动物实验项目结束需要检修或停用为止。